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不論是細(xì)胞治療還是基因治療都離不開(kāi)病毒載體。目前使用較多的病毒載體類型包括:腺相關(guān)病毒(AAV)、慢病毒(Lv)、逆轉(zhuǎn)錄病毒(Rv)和腺病毒(Adv)等,這些常用病毒載體特性如下圖所示:
特征
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慢病毒
Lentivirus |
逆轉(zhuǎn)錄病毒
Retrovirus |
腺相關(guān)病毒
AAV |
腺病毒
ADV |
基因表達(dá)
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穩(wěn)轉(zhuǎn)/瞬轉(zhuǎn)
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穩(wěn)轉(zhuǎn)
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瞬轉(zhuǎn)
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瞬轉(zhuǎn)
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是否能感染可分裂的細(xì)胞
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是
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是
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是
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是
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是否能感染不分裂的細(xì)胞
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是
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是
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否
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否
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是否能整合到靶細(xì)胞基因組
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是
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是
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否
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否
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靶細(xì)胞的免疫反應(yīng)
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低
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較低
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非常低
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高
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病毒滴度
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+++
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++
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+++
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++++
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轉(zhuǎn)染效率
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+++
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++
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+++
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++++
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因此在選擇病毒載體時(shí),除了要考慮載體自身特征之外,如何包裝并獲取高滴度高活性的病毒載體對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要,針對(duì)病毒載體制備5大環(huán)節(jié),小美為您推薦如下解決方案↓
1. 病毒載體包裝質(zhì)粒系統(tǒng)
西美杰代理的美國(guó)Cell Biolabs公司推出的病毒包裝系統(tǒng)可滿足多種重組病毒包裝需求,包括四大類型病毒包裝質(zhì)粒AAV Helper Free System、ViraSafe? Lentivirus Expression Complete Systems、Platinum Retroviral Expression Systems以及RAPAd® Adenoviral Expression Systems等。
2. 病毒包裝試劑
A. 病毒包裝專用轉(zhuǎn)染試劑
西美杰代理的美國(guó)Mirus公司新推出的病毒包裝專用轉(zhuǎn)染試劑TransIT®-VirusGEN?與TransIT®-Lenti系列,專門針對(duì)AAV和Lentivirus設(shè)計(jì),相比傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法能獲得更高的轉(zhuǎn)染效率和病毒滴度,無(wú)動(dòng)物源成分且兼容多種病毒包裝系統(tǒng)及不同細(xì)胞系類型。
品名
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貨號(hào)
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規(guī)格
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適用病毒類型
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TransIT®-VirusGEN? Transfection Reagent
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MIR 6703
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0.3/0.75/1.5mL
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AAV & Lentivirus
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TransIT®-Lenti Transfection Reagent
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MIR 6603
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0.3/0.75/1.5mL
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Lentivirus
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B. Lv/Rv包裝效率增強(qiáng)劑Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up
西美杰代理的101Bio品牌Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up用于重組慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝過(guò)程,可促進(jìn)病毒基因組轉(zhuǎn)錄和RNA穩(wěn)定,使轉(zhuǎn)染效率提高10倍左右。
品名
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貨號(hào)
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規(guī)格
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適用病毒類型
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Lentivirus 10X Titer-Up
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P906
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1 mL
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Lentivirus
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Retrovirus 10X Titer-Up
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P909
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1 mL
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Retrovirus
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C. AAV/Adv病毒釋放液Virus-High® AAV/ADV Release Solution
西美杰代理的101Bio品牌Virus-High® AAV/ADV Release Solution是一款無(wú)需反復(fù)凍融,即可從細(xì)胞中快速高效收獲AAV/Adv病毒以及其他非分泌型無(wú)囊膜病毒的試劑。
品名
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貨號(hào)
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規(guī)格
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適用病毒類型
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Virus-High® AAV / Adv Release Solution
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P900
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10 mL
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AAV & Adv
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3. 高效快速病毒濃縮試劑與純化試劑盒
西美杰代理的美國(guó)Cali-bio和Cell Biolabs品牌專門針對(duì)病毒載體設(shè)計(jì)的高效重組病毒濃縮純化試劑(盒),在獲得重組病毒高回收率的同時(shí)大大簡(jiǎn)化操作流程,無(wú)需超速離心設(shè)備,是中小規(guī)模樣本純化的首選方案。
重組病毒類型
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品名
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貨號(hào)
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特點(diǎn)
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逆轉(zhuǎn)錄病毒
(Retrovirus) |
Retrovirus Concentration Solution(5×)
逆轉(zhuǎn)錄病毒濃縮試劑 |
CB300904
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無(wú)需超速離心;
1小時(shí)內(nèi)病毒濃縮10-100倍; 濃縮后病毒適用于各種細(xì)胞; |
慢病毒
(Lentivirus) |
Lentivirus Concentration Solution(5×)
慢病毒濃縮試劑 |
CB300905
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ViraBind? Lentivirus Purification Kit
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VPK-104
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操作時(shí)間< 2h,無(wú)需超速離心;
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回收率>90%,純化效果與CsCl方法相當(dāng)
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腺相關(guān)病毒
(AAV) |
ViraBind? AAV Purification Kit
(適用樣本量為2個(gè)10cm皿或1個(gè)15cm皿收獲的上清) |
VPK-140
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適用于純化AAV-2與AAV-DJ;
操作時(shí)間約3h; |
ViraBind? AAV Purification Mega Kit
(一次處理樣本量可達(dá)10個(gè)15cm皿收獲的上清) |
VPK-141
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獲得AAV純度>95%,回收率>60%
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腺病毒
(ADV) |
ViraBind? Adenovirus Miniprep Kit
(適用樣本量為1個(gè)T75瓶或1個(gè)10cm皿收獲的上清) |
VPK-099
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采用特殊濾膜和離心柱;
操作時(shí)間約30min,無(wú)需超速離心; |
ViraBind? Adenovirus Purification Kit
(適用樣本量約為4個(gè)T75瓶收獲的上清) |
VPK-100
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回收率>90%,純化效果與CsCl方法相當(dāng)
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4. 病毒滴度檢測(cè)試劑盒
精確測(cè)定重組病毒滴度是提高下游實(shí)驗(yàn)可控性,重復(fù)性和準(zhǔn)確性的前提,西美杰代理的Cell Biolabs品牌針對(duì)不同病毒載體的特性分別設(shè)計(jì)的了多種滴度測(cè)定試劑盒,并且兼容了高效和精確的測(cè)定方法。
重組病毒類型
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品名
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貨號(hào)
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特點(diǎn)
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慢病毒
(Lentivirus) |
Lentivirus Rapid Quantitation Kit
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VPK-112
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快速定量,操作過(guò)程45-60min;
熒光法檢測(cè)病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測(cè); 靈敏度:1010個(gè)病毒粒子/mL或100ul純化前上清 |
Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit
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VPK-107
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專利Pull-down技術(shù)分離出病毒相關(guān)P24蛋白,去除游離P24蛋白;
ELISA方法精確定量有活性的重組慢病毒滴度,避免傳統(tǒng)方法檢測(cè)總P24蛋白導(dǎo)致的誤差 |
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Traditional p24 ELISA Kit
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VPK-108-H
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ELISA方法檢測(cè)總P24蛋白定量慢病毒滴度
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逆轉(zhuǎn)錄病毒
(Retrovirus) |
QuickTiter? Retrovirus Quantitation Kit
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VPK-120
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快速定量,操作過(guò)程45-60min;
熒光法檢測(cè)病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測(cè); 靈敏度:1.5×109個(gè)病毒粒子/mL或100ul純化前上清 |
腺相關(guān)病毒
(AAV) |
QuickTiter? AAV Quantitation Kit
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VPK-145
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快速定量,操作過(guò)程<2h;
熒光法檢測(cè)病毒核酸濃度定量病毒滴度; 靈敏度:純化前AAV可達(dá)109 GC/mL,對(duì)于純化后AAV可達(dá)5×1010 GC/mL |
腺病毒
(ADV) |
QuickTiter? Adenovirus Quantitation Kit
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VPK-106
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快速定量,操作過(guò)程45-60min;
熒光法檢測(cè)病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測(cè); 靈敏度:1010個(gè)病毒粒子/mL或100ul純化前上清 |
QuickTiter? Adenovirus Titer Immunoassay Kit
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VPK-109
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無(wú)需空斑形成實(shí)驗(yàn),避免復(fù)雜的鋪瓊脂步驟,操作更簡(jiǎn)便;
傳統(tǒng)方法10天才可完成的實(shí)驗(yàn),用該試劑盒僅需2.5天,有ELISA和ICC兩種方法供選擇; |
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QuickTiter? Adenovirus Titer ELISA Kit
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VPK-110
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可用于所有41個(gè)血清型的腺病毒
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5. 病毒感染增強(qiáng)試劑
西美杰代理的Cell Biolabs品牌還針對(duì)不同病毒載體研發(fā)了專用促病毒感染試劑,能顯著提高病毒對(duì)靶細(xì)胞的感染,進(jìn)而提高基因表達(dá)效率。
品名
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貨號(hào)
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規(guī)格
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特點(diǎn)
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ViraDuctin? Lentivirus Transduction Kit
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LTV-200
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40 次
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復(fù)合型試劑能與慢病毒或逆轉(zhuǎn)率病毒形成復(fù)合物,與Polybrene®相比病毒感染效率可提高2-6倍,適用于原代細(xì)胞和干細(xì)胞
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LTV-201
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200次
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ViraDuctin? Retrovirus Transduction Kit
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RV-200
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40次
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RV-201
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200次
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ViraDuctin? AAV Transduction Kit
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AAV-200
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10次
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有效提高重組AAV在多種細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)染效率,包括傳統(tǒng)方法轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低的細(xì)胞和非分裂細(xì)胞,如原代細(xì)胞和干細(xì)胞。該試劑使用方便,僅需2h,是AAV轉(zhuǎn)染非分裂細(xì)胞的首選。
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AAV-201
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50次
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ViraDuctin? Adenovirus Transduction Reagent
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AD-200
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10次
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該試劑讓重組腺病毒感染不依賴于細(xì)胞的CAR(柯薩奇病毒-腺病毒受體)水平,可顯著提高病毒感染低CAR或無(wú)CAR表達(dá)的細(xì)胞,如原代細(xì)胞或干細(xì)胞,還可提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)效率
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AD-201
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50次
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